背景描述：

膠原酶（Collagenases），基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase, MMP）家族的成員之一，屬于內(nèi)肽酶類，在三螺旋區(qū)降解天然膠原，參與結(jié)蹄組織的生理和病理周轉(zhuǎn)過(guò)程。膠原是動(dòng)物基質(zhì)結(jié)蹄組織的主要纖維成分。膠原酶可能在腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的多個(gè)階段中，對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲穿透細(xì)胞外基質(zhì)的過(guò)程起到促進(jìn)作用。膠原酶已被支持用于臨床治療杜普征氏掌攣縮（Dupuytren's contracture），佩羅尼氏?。≒eyronie's disease）和傷口愈合。

膠原酶活性檢測(cè)方法很多，傳統(tǒng)的方法包括膠原酶譜法（Collagen Zymography），該法首先將樣本加入含膠原的SDS-PAGE凝膠中電泳，然后在適當(dāng)緩沖液中復(fù)性12-16h，后染色。當(dāng)?shù)孜锉幻附到?，在整個(gè)黑色的背景中能看到清晰透明的降解條帶，從而來(lái)判斷是否存在膠原酶活性。該方法不僅費(fèi)力費(fèi)時(shí)，且很可能因復(fù)性不*逆轉(zhuǎn)，導(dǎo)致酶活性降低，結(jié)果出現(xiàn)較大偏差。

Rapid Collagenase Assay Kit (I) and (II)（Chondrex, Inc）

1. 試劑盒優(yōu)勢(shì)

含有測(cè)定膠原酶活性的所有必要成分包括重組人MMP-8（用作對(duì)照）和兩種類型的膠原酶活化劑。

不同于抗體為基礎(chǔ)的ELISA試劑盒僅能檢測(cè)酶蛋白的存在，這些試劑盒目的在于測(cè)定酶活性。

試劑盒使用FITC標(biāo)記的可溶性牛I型膠原或II型膠原為底物，只需2h就能完成測(cè)試。

比底物凝膠分析法（酶譜法）快10倍，檢測(cè)靈敏度比放射同位素標(biāo)記膠原法更靈敏。

2. 特異性

哺乳動(dòng)物膠原酶

1.3 工作原理

哺乳動(dòng)物膠原酶切割膠原分子上的所有三個(gè)α鏈，產(chǎn)生3/4和1/4大小的膠原片段，TCA和TCB，這兩個(gè)片段的變性溫度分別為34-35℃和28-29℃，而所有完整膠原（天然膠原）的變性溫度是40℃。因此，35℃下這些切割片段能選擇性變性為隨機(jī)的螺旋構(gòu)象，能夠被一種有機(jī)溶劑提取出來(lái)。為了縮短變性過(guò)程（通常需60min），一種蛋白酶被引入用來(lái)進(jìn)一步消化膠原酶降解后的產(chǎn)物。

1.4 反應(yīng)步驟

1.5 試劑盒訂購(gòu)