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鈣離子熒光探針FLUO-3AM應(yīng)用詳解

更新時(shí)間:2013-06-19點(diǎn)擊次數(shù):3243

一、Fluo-3AM的理化性質(zhì)
顏色及形狀:橘紅色液體
純度:,大于95%(液相)
溶解性:溶于DMSO
吸收波長(zhǎng)/發(fā)射波長(zhǎng):506nm /526nm(低/高鈣)  
消散系數(shù):86000/Mcm(506nm)
保存與使用:粉狀的FLUO-3AM應(yīng)保存于-20度以上。建議使用DMSO作為溶媒。在溶解前,F(xiàn)LUO-3AM和DMSO均須放置至室溫。溶解過(guò)程可能會(huì)比較慢。用無(wú)水的DMSO溶解的FLUO-3AM長(zhǎng)期保存,應(yīng)嚴(yán)格密封,并保存于-20度。使用前,將保存液放置至室溫后再打開??杀苊釧M探針在長(zhǎng)期的保存過(guò)程中水解。
二、Fluo-3AM的工作原理
      FLUO-3廣泛用于長(zhǎng)波長(zhǎng)的熒光鈣指示劑。其在506NM處被吸收,可以被氬離子激光的488nm激發(fā)光激發(fā),便于檢測(cè)。FLUO-3在沒有同鈣結(jié)合的情況下,無(wú)熒光產(chǎn)生。但是,在與鈣結(jié)合后,熒光(526nm)增強(qiáng)至少40倍。Fluo-3 AM是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fluo-3 AM的熒光非常弱,其熒光不會(huì)隨鈣離子濃度升高而增強(qiáng)。Fluo-3 AM進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3,從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fluo-3可以和鈣離子結(jié)合,結(jié)合鈣離子后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光,zui大激發(fā)波長(zhǎng)為506nm,zui大發(fā)射波長(zhǎng)為526nm。實(shí)際檢測(cè)時(shí)推薦使用的激發(fā)波長(zhǎng)為488nm左右,發(fā)射波長(zhǎng)為525-530nm。
三、Fluo-3AM的應(yīng)用
1、過(guò)程概述
用于細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測(cè)時(shí),F(xiàn)luo-3 AM的常用濃度為0.5-5μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-3 AM的適當(dāng)溶液和細(xì)胞一起在20-37℃孵育15-60分鐘進(jìn)行熒光探針裝載,隨后適當(dāng)洗滌,洗滌后可以考慮適當(dāng)再孵育20-30分鐘以確保Fluo-3 AM在細(xì)胞內(nèi)*轉(zhuǎn)變成Fluo-3。然后在流式細(xì)胞儀上進(jìn)行檢測(cè)。
2、Fluo-3AM使用液的配置
100ug的Fluo-3AM,分子量是1219.9。按實(shí)際需要的摩爾濃度折算,無(wú)水DMSO溶解。一般配置成1~5mM的DMSO儲(chǔ)存液。如出現(xiàn)難溶現(xiàn)象,可以用20%的F127的DMSO溶液助溶。
四、注意事項(xiàng):
1、熒光染料有淬滅問(wèn)題,應(yīng)盡量避光保存;
2、實(shí)驗(yàn)時(shí)注意個(gè)人防護(hù),戴手套、口罩;
五、應(yīng)用舉例
(一)配置與貯存
1、基本信息
 分子量:1129.9                  包裝單位重量:0.1mg
 貯存濃度:5000μM/L             使用終濃度:5μM/L
2、貯存液的配制(5000μM/L)
   按照說(shuō)明書,計(jì)算0.1mg 的摩爾數(shù)為0.089μM ,則需加DMSO18uL,微量加樣器反復(fù)吹打混勻后分裝,按說(shuō)明書要求避光-20度冰凍保存。
(二)應(yīng)用
   每毫升細(xì)胞懸液中加入1 uL,則Fluo-3AM的使用終濃度為5μM/L
 
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貨號(hào)
名稱
規(guī)格
價(jià)格
50013
Fluo-3, AM ester, 10x100ug
1mg
300
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Fluo-3, AM ester, 100ug
100ug
2000
 

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