服務(wù)熱線
18611095289
AAmerican Diagnostica GmbH,ADI 公司
Freee Protein S ELISA (Cat.no 842)中文說明書
(中文說明書供參考,請(qǐng)以英文說明書為準(zhǔn))
簡介,檢測原理(略)
試劑盒組成:
試劑準(zhǔn)備和保存
樣品收集和制備
檸檬酸抗凝的血小板缺乏的血漿或血清適用于該實(shí)驗(yàn)。
血漿按以下方式制備:
檢測的樣本和Protein S control需用protein S 樣品稀釋液1:50稀釋,如果樣品濃度可能高于100%,需做高濃度稀釋。如果樣本濃度x<10%,樣本只需做小于1:50低濃度稀釋
校準(zhǔn)品制備
Free Protein S 濃度以占血漿百分比(%)表示,。100% Free Protein S濃度相當(dāng)于:正常血漿(混合池)1:50稀釋后的濃度。
按一下方式制備校準(zhǔn)品:
Free Protein S(%) | C | C/2 | C/4 | C/10 | C/20 | 0 |
校準(zhǔn)品加入量 | 1ml | 0.5 ml | 0.25 ml | 0.1 ml | 0.05 ml | 0 |
校準(zhǔn)品稀釋液加入量 | 0 ml | 0.5 ml | 0.75 ml | 0.90 ml | 0.95 ml | 1.0 ml |
充分混勻,標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液室溫穩(wěn)定性至少4個(gè)小時(shí)(18-25℃)
操作流程:
試劑 | 加入量 | 流程 |
Anti-Human Free Protein S-HRP | 100ul | 每孔加入100ul Anti-Human Free Protein S-HRP |
Protein S Standard diluted sample 或Protein S sample diuent(blank) | 100ul | 立即加入100ul ProteinS 標(biāo)準(zhǔn)品和檢測樣本至對(duì)應(yīng)孔 |
室溫(18-25℃)孵育1小時(shí)(手動(dòng)輕震板或振板器振板) | ||
Protein S 稀釋液 | 300ul | 洗板5次 |
TMB底物顯色液 | 200ul | 洗滌完畢后,立即每孔加入200ul底物顯色液 |
室溫(18-25℃)孵育5min() | ||
0.45M H2SO4 | 50ul | 加入0.45M H2SO4終止液 |
等待10min待顏色穩(wěn)定,450nm測定吸光度,減去空白吸光度。 |
注意:
結(jié)果:
以Protein S 標(biāo)準(zhǔn)品濃度(%)做橫坐標(biāo),平均吸光度做縱坐標(biāo),每次檢測都需要重新做標(biāo)準(zhǔn)曲線,如圖所示。
計(jì)算:
從曲線可直接計(jì)算出ProteinS 的濃度(樣品按:1:50稀釋)。如果樣品做了高濃度的稀釋,需乘以對(duì)應(yīng)稀釋系數(shù)D(例如:樣本做了1:100稀釋后,測值需乘以2,1:200稀釋后,測值需乘以4) 。如果做低濃度的稀釋,得到的檢測值需除以稀釋倍數(shù)。
檢測程序的局限性:
因?yàn)楹凶觾?nèi)的單抗是鈣依賴性單抗,所以請(qǐng)用盒子里自帶的Wash Buffer (含鈣)。如果洗滌不充分,得到的樣品檢測OD值會(huì)很高,為避免非特異性顯色,請(qǐng)確保洗滌的充分性。
測值:
血漿中Protein S 濃度正常值:60-150%,因此非正常值<60%。一般男性測值會(huì)高于女性,且隨年齡和血脂濃度增加。