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產(chǎn)品中心

當(dāng)前位置:首頁產(chǎn)品中心Chondrex膠原檢測(cè)天狼猩紅總膠原檢測(cè)試劑盒 Sirius Red

天狼猩紅總膠原檢測(cè)試劑盒 Sirius Red
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

Chondrex提供天狼猩紅總膠原檢測(cè)試劑盒 Sirius Red,用于檢測(cè)樣本,包括:組織、細(xì)胞培養(yǎng)液和細(xì)胞中的總膠原蛋白。該試劑盒可檢測(cè)40例樣本(復(fù)孔),實(shí)驗(yàn)時(shí)間少于30min。由于細(xì)胞培養(yǎng)液總的膠原含量較低,可能需要對(duì)樣本做濃縮處理。

產(chǎn)品型號(hào):

更新時(shí)間:2024-12-12

廠商性質(zhì):代理商

訪問量:4269

服務(wù)熱線

01084640949

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產(chǎn)品介紹

天狼猩紅總膠原檢測(cè)試劑盒

Sirius Red Total Collagen Detection Assay KitCatalog # 9062

僅用于科研,不可用于診斷

背景簡(jiǎn)介:

天狼星紅是一種*的染料,它與纖維性膠原(I型至V型)上的[Gly-X-Y]n螺旋結(jié)構(gòu)特異性結(jié)合,不區(qū)分膠原蛋白種類和膠原類型,因此用于總膠原的檢測(cè)。Chondrex提供天狼星紅總膠原蛋白檢測(cè)試劑盒,用于檢測(cè)樣本,包括:組織、細(xì)胞培養(yǎng)液和細(xì)胞中的總膠原蛋白。該試劑盒可檢測(cè)40例樣本(復(fù)孔),實(shí)驗(yàn)時(shí)間少于30min。由于細(xì)胞培養(yǎng)液總的膠原含量較低,可能需要對(duì)樣本做濃縮處理。

產(chǎn)品說明:

產(chǎn)品描述:用于檢測(cè)樣本中的總膠原

形式:96孔可拆版

檢測(cè)方法:比色法

實(shí)驗(yàn)時(shí)間:30min

檢測(cè)范圍500 µg/ml to 8 µg/m

檢測(cè)數(shù)量:40(復(fù)孔)樣本/

樣本類型:組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)液、細(xì)胞

樣本稀釋比:根據(jù)樣本類型而定

發(fā)色團(tuán):N/A(510-550nm讀取)

保存:-20 保存12個(gè)月

試劑盒組成:

組分

數(shù)量

規(guī)格

保存溫度

標(biāo)準(zhǔn)品-II型膠原(90621

1

0.5 mg/ml, 1 ml

-20°C

天狼猩紅溶液(90622

1

50 ml

-20°C

洗液(90623

1

50 ml

-20°C

提取液(90624

1

30 ml

-20°C

0.5M醋酸(10X醋酸)(90625

1

20ml

-20°C

96孔板(9026

1

8-well strips x 12

-20°C


注:1)洗液,提取液,0.5M的醋酸和96孔板也可以室溫保存

2)用于細(xì)胞培養(yǎng)液樣本的的濃縮液(50 ml, Catalog # 90626))不包括在盒子內(nèi),需要單獨(dú)訂購。


樣本制備:

可用于檢測(cè)組織勻漿樣本和細(xì)胞。固體樣本需要溶解后檢測(cè)。此外,細(xì)胞培養(yǎng)液需要做濃縮處理(請(qǐng)參照第三頁實(shí)驗(yàn)步驟)。另外,熱變性的膠原對(duì)天狼猩紅的結(jié)合性差,會(huì)導(dǎo)致結(jié)果值偏低。

依據(jù)溶解緩沖液的不同,以下膠原樣本可用于檢測(cè):

  1. 中性緩沖液溶解的膠原溶液(0.15mol/L NaCl in 0.1M Tris-HCl, pH 7.4

  2. 醋酸溶解的膠原溶液(0.05mol/L的醋酸)

  3. 含胃蛋白酶的膠原溶液(0.05mol/L的醋酸,含胃蛋白酶)

Chondrex 推薦“制備含胃蛋白酶的可溶液膠原溶液"制備方案

細(xì)胞培養(yǎng)液樣本制備:

含高濃度血清的細(xì)胞培養(yǎng)物會(huì)導(dǎo)致高背景值。因此,我們推薦用PBS降低細(xì)胞培養(yǎng)物中的血清濃度到5%。

樣本濃縮:

細(xì)胞培養(yǎng)物中的血清濃度一般來說很低,因此用試劑盒直接檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)物中的膠原很難檢測(cè)得到。Chondrex公司通過濃縮液(Cat # 90626)參照樣本濃縮流程對(duì)樣本進(jìn)行濃縮。如果檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)物,請(qǐng)?jiān)O(shè)置陰性對(duì)照,用濃縮液的話可能會(huì)導(dǎo)致背景升高。

  1. 加入1ml細(xì)胞培養(yǎng)液

  2. 加入250ul濃縮緩沖液

  3. 渦旋混勻后,4℃孵育16-24小時(shí)

  4. 10000rpm離心3min

  5. 棄上清液

  6. 加入100ul 0.05mol/L的醋酸溶解沉淀物。用溶解后的樣本,作為檢測(cè)樣本。

  7. 樣本中膠原濃度為測(cè)定值x0.1。

操作流程:

  1. 加入100ul稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本到管內(nèi)。

  2. 加入500ul天狼猩紅溶液到管內(nèi)

  3. 混勻后,室溫孵育20min,10000rmp離心3min,小心吸取上清,并棄上清。

  4. 加入250ul提取液到各管內(nèi)。

  5. 渦旋混勻使沉淀物*溶解。

  6. 從各管內(nèi)取200ul到檢測(cè)板

  7. 讀取530nm(510-550nm)吸光度

注意:

  1. 推薦標(biāo)準(zhǔn)品和樣本均做復(fù)孔檢測(cè)

  2. 所有的緩沖液在用前置于室溫平衡。

  3. 用移液管準(zhǔn)確定量緩沖液體積,提供的緩沖液都是足量的。

  4. 如果一次用不完的原液試劑,請(qǐng)還在原瓶?jī)?nèi)-20℃保存,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

  5. 試劑盒含有未感染的動(dòng)物的動(dòng)物組分,丟棄請(qǐng)做生物安全處理。

實(shí)驗(yàn)流程:

  1. 1X醋酸溶液制備:用雙蒸水,制備足夠的1X醋酸溶液(0.05M)。

  2. 標(biāo)準(zhǔn)品制備:用1.5ml離心管或者細(xì)胞培養(yǎng)管制備標(biāo)準(zhǔn)品溶液,加入250ul 0.05mol/L的醋酸(空白)到7管內(nèi)。加入250ul標(biāo)準(zhǔn)品(500ug/ml)和等體積的0.05mol/L的醋酸混合(250ug/ml)。一次重復(fù)此步驟,制備:125,63,31.5,16,和8ug/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液

  1. 樣本制備:1.5ml離心管或者細(xì)胞培養(yǎng)管制備樣本溶液。如果樣本中的膠原濃度范圍不確定,需要用0.05mol/L的醋酸溶液做系列稀釋后,確定樣本大概范圍后再檢測(cè)。

  2. 加入樣本和標(biāo)準(zhǔn)品:加入100ul ,空白,稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本到離心管內(nèi),做復(fù)管。

  3. 加入天狼猩紅溶液:加入500ul天狼猩紅溶液到各管。渦旋混勻,室溫孵育20min

  4. 離心:10000rpm離心3min。去除上清,不要接觸底部的沉淀物。如果不小心接觸到,重新離心,小心去除上清。

  5. 加入洗液:加入500ul洗液到各管。渦旋混勻后,重懸沉淀物。

  6. 離心:10000rpm離心3min。去除上清,不要接觸底部的沉淀物。如果不小心接觸到,重新離心,小心去除上清。

  7. 加入提取液:加入250ul提取液到各管。渦旋混勻后,充分溶解。

  8. 讀數(shù):從各管取200ul96孔板。讀取510-550nm的吸光度值。

結(jié)果計(jì)算:

  1. 計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品,空白和檢測(cè)樣本的OD平均值。

  2. 用標(biāo)準(zhǔn)品和樣本OD平均值減去空白OD均值。

  3. Y軸做OD值,X軸做標(biāo)準(zhǔn)品濃度,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

  4. 通過回歸曲線計(jì)算樣本濃度。樣本實(shí)際濃度應(yīng)在測(cè)值的基礎(chǔ)上乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

  5. 如果OD值超出標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)范圍,請(qǐng)對(duì)樣本做稀釋后,再檢測(cè)。




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